Hsa-miR-146b-3p靶向CREB3L3调控PI3K/Akt通路促进内皮细胞功能障碍及动脉粥样硬化进程
目的:研究hsa-miR-146b-3p对内皮细胞的影响及其在动脉粥样硬化中的潜在作用和机制。方法:通过慢病毒构建EA.hy926内皮细胞干预模型,将细胞分为4组:(1)过表达组:OE_hsa-miR-146b-3p组和OE_control组;(2)沉默组:SH_hsa-miR-146b-3p组,SH_control组。采用CCK-8实验检测细胞的增殖能力,细胞划痕及Transwell实验检测迁移能力,细胞周期和凋亡检测分别探讨细胞的分布特征和凋亡率;通过转录组测序(RNA-seq测序)和双荧光素酶实验验证hsa-miR-146b-3p的下游靶点;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹实验(western blotting)检测靶基因的表达量。结果:与对照组比较,过表达hsa-miR-146b-3p显著促进EA.hy926细胞增殖(P0.05)、迁移(P0.01)及S期细胞比例(P0.01),并升高晚期凋亡率和总凋亡率(P0.05);沉默组则呈现增殖抑制(P0.05)、迁移能力减弱(P0.01)并降低S期比例(P0.05),同时减少早期凋亡率(P0.05)。RNA-seq测序联合双荧光素酶实验证实hsa-miR-146b-3p调控PI3K/Akt通路上的CREB3L3(P0.001)。RT-qPCR和western blotting结果显示,hsa-miR-146b-3p过表达导致CREB3L3表达水平下降。结论:Hsa-miR-146b-3p可能通过下调CREB3L3的表达水平及其所在的PI3K/Akt通路而影响内皮细胞的功能并促进动脉粥样硬化的发生发展。
广西医科大学学报
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