目的：评估实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测皮肤脓液标本对HIV阴性马尔尼菲篮状菌病（TSM）的诊断价值。方法：选择2020年1月至2024年12月就诊于广西医科大学第一附属医院的27例临床表现有皮肤脓液的疑诊TSM患者（22例确诊TSM,5例非TSM，均为HIV阴性），同时采集27例患者的皮肤脓液及血清样本，进行RT-qPCR、真菌培养、真菌镜检及血清学检测。结果：22例确诊TSM的患者标本中，血清RT-qPCR检测阳性率为9.09%(2/22)，而皮肤脓液标本RT-qPCR检测阳性率高达68.18%(15/22)，二者阳性率比较差异具有统计学意义（P0.001）。此外，在确诊的TSM患者中，有5份皮肤脓液标本真菌培养结果显示阴性，但同份皮肤脓液标本RT-qPCR检测阳性。5例非TSM患者的血清及皮肤脓液标本RT-qPCR检测均为阴性。结果提示，皮肤脓液RT-qPCR检测的诊断效能高于血清RT-qPCR、脓液培养、脓液镜检及血清半乳甘露聚糖检测。结论：以皮肤脓液作为标本的RT-qPCR检测可快速诊断TSM，在HIV阴性TSM患者的早期诊断中具有较高的应用价值。